來源:西安海研生物科技公司         發(fā)布時(shí)間:2021-01-25
(1)樣本處理與培養(yǎng)
根據(jù)Legiolert說明書進(jìn)行。在無菌微管中加入1mL Legiolert 預(yù)處理液及1 mL樣品,渦旋混勻后室溫下溫育1 min,轉(zhuǎn)移至100 mL 溶解的Legiolert試劑中,充分混合并倒入Legiolert 量盤,用SealerPlus 程控定量封口機(jī)密封。
將密封好的Legiolert定量盤紙側(cè)向下置于(37±0.5)℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)7 d。7 d后,定量盤中棕色孔或渾濁孔即為陽性孔。
(2)陽性孔確證試驗(yàn)
為了檢驗(yàn)酶底物法的特異性,對Legiolert定量盤中陽性孔進(jìn)行確證試驗(yàn)。Legiolert定量盤共有6個(gè)大孔,90個(gè)小孔。如果陽性孔數(shù)小于10個(gè),全部進(jìn)行確證;如果陽性孔數(shù)大于10個(gè),先選取10個(gè)(包括全部大孔及隨機(jī)選取的小孔),再加上隨機(jī)選取剩余陽性孔數(shù)的 25%進(jìn)行確證。確證方法為使用無菌注射器抽取10 μL懸浮液,涂布BCYE和L-半胱氨酸缺失的 BCYE,35 ~ 37 ℃培養(yǎng)48 ~ 72 h,在BCYE上生長、L-半胱氨酸缺失的BCYE 上無生長的菌落進(jìn)行生化鑒定、血清型別鑒定及real-timePCR 鑒定。
(3)酶底物法的計(jì)量結(jié)果
酶底物法采用MPN法確定樣本中嗜肺軍團(tuán)菌含量,計(jì)算陽性大孔和小孔的數(shù)目,并從 LegiolertMPN 表獲得所得MPN值。MPN是應(yīng)用概率理論來估算細(xì)菌濃度,實(shí)際菌落數(shù)有可能落在置信區(qū)間內(nèi)的任何一點(diǎn),MPN值是落在這個(gè)置信區(qū)間內(nèi)概率大的一點(diǎn)。